Competent Quick DH5α

 

【キャンペーンチラシはこちらからダウンロードできます】

約10分間で形質転換可能な大腸菌コンピテントセルです。

本製品は、短時間で高い形質転換効率が得られるように調製されたサブクローニンググレードの大腸菌DH5αコンピテントセルです。従来のコンピテントセルでは、形質転換に1.5〜2時間を要しましたが、本製品では、約10分間のプロトコールで確実に形質転換体を得ることができます。 また、−80℃での長期保存が可能となっています。

特長1 　簡便・迅速に形質転換可能 注１）
約10分間で形質転換が完了します（図１）。



特長2 　高い形質転換効率 注２）
pBR322を用いて形質転換を行い、アンピシリンにてセレクションした場合、＞1ｘ10⁸ transformants /μg・pBR322　の効率が得られます。

特長3  保存安定性良好
-80℃で少なくとも3ヶ月は安定です（図2）。さらに長期間保存される場合には、液体窒素中での保存をお薦めします。


特長4  高いコストパフォーマンス
20本入りとなり、さらにお買い上げいただきやすくなりました。


実施例1　形質転換効率の評価

 

pBR322(4.4kb:Ampicillin^r, Tetracycline^r)、pAK119(4.3kb:Kanamycin^r)、
pAT5（4.6kb:Chloramphenicol^r）の各プラスミド10pg / 5μl TE bufferを用いて本プロトコールに従って形質転換を行い、各抗生物質でセレクションした場合の形質転換効率の評価を行いました。
また、同時に、本プロトコールのヒートショック操作の後に、SOC培地での培養ステップ（37℃、30分間あるいは60分間）を追加したプロトコールでも評価を行いました。 その結果、アンピシリン及びカナマイシンでセレクションした場合には、わずか10分間の本プロトコールで10⁸ transformants /μg・plasmid以上の効率が得られました。
一方、テトラサイクリン及びクロラムフェニコールでセレクションした場合では、ヒートショック後にSOC培地での培養ステップを追加することにより、10⁸以上の効率が得られることが分かりました。
なお、本実験では、LB寒天培地の各抗生物質は下記の濃度にて実施しました。

《使用した薬剤の濃度》
   ・アンピシリン(Amp)：50μg/ml
　 ・カナマイシン(Kan)：10μg/ml
　 ・テトラサイクリン(Tet)：20μg/ml
　 ・クロラムフェニコール(Cm)：100μg/ml

※カナマイシンに関しましては、薬剤濃度に影響を受けやすいため、本コンピテントセルを用いる場合は、薬剤濃度への配慮が必要となります。

実施例2　Competent Quick DH5αと当社従来品の比較
以下に当社従来品Competent High DH5αとの比較表を示します。
目的に応じた使い分けが可能です。

●形質転換に使用するプラスミドの容量について
コンピテントセル容量の25%以上のDNA溶液を添加すると、効率が半減します。

●形質転換に使用するプラスミドのサイズについて
プラスミドの大きさが7.5kbを越えると、サイズが大きくなるにしたがって、効率は低下します。pBR322（4361bp）の形質転換効率に対して、10kbでは約50％、15kbでは約20%になります。また、プラスミドのサイズが10kbを越えると、形質転換を行えても、大腸菌での複製中に欠失が起こる場合があります。
●形質転換に使用するプラスミド量について
形質転換に使用するプラスミドの量は、0.1pg〜10ngの範囲が適しています。10ngを越えると、形質転換効率は低下する傾向にあります。

●形質転換に使用するコンピテントセルの容量について
形質転換に使用するコンピテントセルは、50 〜200μlの間では効率に変化はありません。 10μlでは効率は半減、400μlでは倍増します。 

＜ご注意＞
1.本形質転換プロトコールによって得られるコロニー数は、セレクションに用いる抗生物質の種類および寒天培地中の濃度等によって変動します。特に、アンピシリン以外の抗生物質を使用する場合には、形質転換効率が著しく低下する場合があります（実施例１参照）。

※カナマイシンにつきましては、効率が薬剤濃度に影響を受けやすいので、本コンピテントセルをお使いの場合は、特に薬剤濃度への配慮が必要です。
※アンピシリン以外の薬剤（特に、テトラサイクリンとクロラムフェニコール）を使用される場合には、Competent high DH5αのご使用をお薦めします。

2.ライブラリーの作製など、さらに高い形質転換効率が必要な用途には、Competent high DH5αのご使用をお薦めします。

＜遺伝子型＞
弊社従来品Competent High DH5αと同様で以下のようになります。

1）Mandel,M. and Higa,A.,J.Mol. Biol.,53:159−162（1970）
2）Dagert,M. and Ehrlich,S.D.,Gene,6:23−28（1974）
3）Kushner,S.R.,in Genetic Engineering（Boyer,H.W. and Nicosia, S.,Eds.）,17−23, Elsevier/North Holland, Amsterdam（1978）
4）Hanahan,D.,J.Mol.Biol.,166: 557−580（1983）
5）Inoue,H.,Nojima,H. and Okayama, H.,Gene,96: 23−28（1990） 

※コンピテントセルのみの包装となります。 SOC培地 及びPositive Control Plasmidは添付されておりません。

*コンピテントセルの他にSOC培地 1ml×10本、及びPositive Control Plasmidが添付されています。

【FAQ】
Competent Quick DH5α

【関連製品記事】
高効率ライゲーション試薬：「Ligation high」
高効率ブランティングキット：「Blunting high」
高効率プラスミド抽出キット：MagExtractor^TM  Plasmid」
高効率DNA断片抽出キット：「MagExtractor^TM  -PCR& Gel Clean up-」

【遺伝子組換え・クローニング関連記事】
●増幅産物の末端の形状とTAクローニング
●平滑末端クローニング
●部位特異的変異導入
●iPCR法におけるプライマー設計のコツ