先生方からいただきましたKOD FXの使用例を掲載いたしております。実験にお役立てください。
| 実施例 5： Human転写因子（HNF3b, C/EBPβ, FTFおよび HNF6）cDNAとmiR-17,18,19,20,92領域genomic DNAの増幅 |
【遺伝子名、ターゲット長、及びプライマー配列】
●HNF3b (ターゲット長：1.4kb)
プライマー 5'ACTCGAATTCCAGTATGCTGGGAGCGGTGAAGA3’
5'AAGGGGTACCAGAGTTAGCCGGGCCTGAA3'
●C/EBPβ (ターゲット長：1.0kb)
プライマー 5'ATTAGAATTCGTTCATGCAACGCCTGGTGGCC3'
5'CGCGGGTACCGCGCTAGCAGTGGCCGGAGGA3'
●FTF (ターゲット長：1.6kb)
プライマー 5'CTATGAATTCACTAAGAATGTCTTCTAATTC3'
5'ATTCGATATCTTTAAAGCAAGTTTTTAA3'
●HNF6 (ターゲット長：1.4kb)
プライマー 5'TCGCGAATTCCACGATGAACGCGCAGCTGACCAT3'
5'CTTTGGTACCGAGGTTTTAGTTTGTGGTTCT3'
● miR-17,18,19,20,92領域 (ターゲット長：1.1kb)
プライマー 5'GGTTACTAGTTGTTAGAGTTTGAGGTGTTA3'
5'TATGACTAGTCATATCGCAATACTTAACAG3
(赤字はhomologous sequenceを示します）
【サンプル】
HNF3b, C/EBPβ,FTF,HNF6:
ヒト肝癌由来細胞株HuH7由来cDNA(0.1μg Total RNA相当）
miR-17〜92:
ヒト肝癌由来細胞株HuH7由来Ｇｅｎｏｍｉｃ DNA 0.2μg
【サイクル】
KOD FX：
94℃ 2min-
(98℃ 10sec, 55℃ 30sec, 68℃ 2min) ×40cycles
他社酵素：推奨条件
【データご提供】
金沢大学がん研究所細胞情報調節
黒木和之 先生
【先生からのコメント】
容易に各種クローンを入手でき驚きました。
| 実施例 6：植物発現プロモーターに連結させた植物ウイルスcDNA増幅 |
【遺伝子名】発現プロモーター＋植物ウイルスcDNA
【サンプル】プラスミドDNA 0.2μg
【ターゲット長】11kb
【プライマー条件】21 mer（GC=21%）
【サイクル】
KOD FX：
94℃, 2.5min.,
(94℃, 15sec., 57℃, 15sec., 68℃, 7min.） x 25
A社Long PCR酵素、高正確性酵素：
94℃, 2.5min.,
(94℃, 15sec., 57℃, 15sec., 72℃, 7min.） x 25
【データご提供】
日本大学生物資源科学部 植物病理学研究室 井村 喜之 先生
【先生からのコメント】
KOD FXは、A社のLong PCR酵素と比較して増幅効率がはるかに優れていた。また、A社高正確性酵素ではどの条件でも増幅することができなかった。
さらに、KOD FXは50μlの系に対して1Uの使用で充分な結果が得られた。
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