【遺伝子名】 rbcL
【サンプル】 トマト葉、タバコ葉、イネ葉、精米
【ターゲット長】 約1.3 kb
【プライマー配列】
Primer F1:5’-ATGTCACCACAAACAGAGACTAAAGC-3’ （トマト＆タバコ用）
Primer R1:5’-AAGCAGCAGCTAGTTCCGGGCTCCA-3’ （トマト＆タバコ用）
Primer F2:5’-ATGTCACCACAAACAGAAACTAAAGC-3’ イネ用
Primer R2:5’-AAGCTGCGGCTAGTTCAGGACTCCA-3’ イネ用
【サイクル】
94°C 2 min.
(98°C 10 sec. 68°C 1.5 min.)×30cycles
※プライマーのTm値が72℃未満の場合は、3ステップで行います。
【PCR組成】
滅菌蒸留水 10<μl>
2x PCR Buffer for KOD FX 25
2mM dNTPs 10 （0.4 mM）
10 pmol/μl F 1.5
10 pmol/μl R 1.5
KOD FX (1U/μl) 1（1U）
ライセート（ワンステップ法） 1
----------------------------------------------
Total 50 μl
【結果】
【コメント】
本方法を用いることで、トマト、タバコ、イネの葉、及び精米のライセートをサンプルとして、明瞭な増幅が認められました。増幅は、KOD FXを用いたときのみ認められたことから、ワンステップ法とKOD FXを組み合わせることで、植物の遺伝子解析を簡素化できると思われます。
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