Can Get Signal ユーザー様実施例3

【結果・コメント】
Can Get Signal^®を使用した場合、どのブロッキング条件でも感度が大きく上昇しました。PVDF Blocking Reagentは今回の検討では5%スキムミルクと同 程度のブロッキング効果が見られました。以前からCan Get Signal^®を使用していましたが従来の条件と比較したことが無かったため、今回改めてCan Get Signal^®により検出感度が大きく上昇することが実感できました。

（追加検討後のコメント）
ブロッキング時間を延ばすことでバックグラウンドシグナルが若干減少しました。二次抗体濃度に関しては1/30000希釈にすることでバックグラウンドシグナルが減少し、S/N比の改善が認められました。

【データご提供】
藤田保健衛生大学・総合医科学研究所・難病治療学研究部門
常陸 圭介 先生

1.　サンプル
マウスの骨格筋のライセート(実験1：100μg/Lane, 実験2：50μg/Lane)

2.　タンパク質のウェスタンブロッティング
●ブロッティング方法：セミドライ法
●メンブレンのブロッキング
(1)ブロッキング溶液：5% Skim Milk in TBST, 5% BSA in TBST, PVDF Blocking Reagent for Can Get Signal^®
(2) インキュベート温度：室温
(3) インキュベート時間：１時間 (or 4時間)

3.　抗体の反応
＜一次抗体＞
(1) メーカー名 ：Cell Signaling Technology
(2) 商品名 ：rabbit anti-Phospho-Smad3 (Ser433/435)
(3) 希釈倍率：1/1000
(4) 希釈溶液：TBST or Can Get Signal^® Solution1
(5) インキュベート温度：4℃
(6) インキュベート時間：O/N

＜二次抗体＞
(1) メーカー名 ：Cell Signaling Technology
(2) 商品名：Anti-rabbit IgG, HRP-linked
(3) 希釈倍率：1/10000 or 1/30000 or 1/50000
(4) 希釈溶液：TBST or Can Get Signal^® Solution2
(5) インキュベート温度：室温
(6) インキュベート時間：１時間
 
4.　シグナルの検出
PIERCE、SuperSignal West Femto