免疫反応促進試薬Can Get Signal^®を用いるウェスタンブロット解析に適した人工合成
ブロッキング試薬です。
本製品は、弊社免疫反応促進試薬「Can Get Signal^® Immunoreaction Enhancer Solution」を用いるウェスタンブロット解析に適した、Ready-to useのブロッキング試薬です。　
ウェスタンブロット解析において多用されるPVDFなどのメンブレンに対する親和性が向上しており、高いブロッキング性能を発揮します。また本試薬は、人工合成ポリマーを主成分とし、タンパク性の成分を含まず、リン酸化タンパク質等の検出に適しています。 是非Can Get Signal^®と組み合わせてご使用ください。

特長1. 高いブロッキング性能
本試薬は、PVDF膜を用いるウェスタンブロット解析での使用に最適化されており、
高いブロッキング性能を発揮します。
また、免疫反応促進試薬Can Get Signal ^® を用いるウェスタンブロット解析に適しています。

特長2.　プロテインフリー
本試薬は合成ポリマーであり、タンパク質性の成分を含有しないため、
リン酸化タンパク質の検出などに最適です。

特長3.　マスキング効果を低減
本試薬は、スキムミルク・ゼラチン等のブロッキング剤使用時に問題となる、
抗原のマスキングによるシグナル低下が少なく、高いシグナル/ノイズ比を得ることができます。


実施例１：各種ブロッキング剤との性能比較

本ブロッキング試薬、5%スキムミルク(in TBS-T)、5%BSA(in TBS-T)、およびA社製液状ブロッキング試薬を用いて、HeLa 細胞ライセートをサンプルとして、ERK2タンパク質のウェスタンブロット法による検出を試みました。抗原抗体反応希釈液にはCan Get Signal^® を用いました。その結果、本試薬を用いた場合で、最もバックグラウンドが低く、かつシグナルが高い明瞭な結果を得ることができました。



【使用抗体】Santa Cruz Biotechnology社の以下の抗体を使用。
1次抗体：anti-ERK2(C-14) rabbit polyclonal IgG(Code No.SASC154)、2000倍希釈
2次抗体：anti-rabbit IgG goat polyclonal IgG(Code No.SASC2301)、20,000倍希釈


実施例2：リン酸化タンパク質の検出

本製品をブロッキング剤として使用したウェスタンブロットによって、リン酸化タンパク質(p-ERK1、p-ERK2)の検出を行いました。抗体反応希釈液には、弊社免疫反応促進試薬Can Get Signal ® を使用しました。その結果、非特異バンドの出現も少なく、p-ERK1 (44kDa)、p-ERK2 (42kDa)それぞれに由来する2本のバンドが明瞭に確認されました。EGF刺激の有無による差も明確に確認できました。また、リン酸化タンパク質検出時にしばしば問題となる、ブロック剤中のカゼイン等に起因するバックグラウンドの生成も認められませんでした。

1. HeLaライセート希釈なし 2. 1/4希釈 3. 1/16希釈【使用抗体】Santa Cruz Biotechnology社の以下の抗体を使用。【1次抗体】anti-pERK(E-4) mouse monoclonal IgG 2a(Code No.SASC7383)、1000倍希釈 【2次抗体】anti-mouse IgG HRP goat polyclonal IgG(Code No.SASC2005)、20,000倍希釈

                                      　　               
　　　図2.リン酸化ERK蛋白質の検出　　　　

実施例1 還元、及び非還元下でのhHGFの解析例

<保存温度>
-20℃

<製品内容>
＜PMW-101＞
Low range markers 500μl,Special Dye set,SDS-Dye（-DTT） 900μl,1M DTT 100μl
（バンドサイズ）97,66,45,29,20,14.3KDa

＜PMW-102＞
Broad range markers 500μl,Special Dye set,SDS-Dye（-DTT） 900μl,1M DTT 100μl
（バンドサイズ）227,116,66,56,45,36,31,29,20,14.3,6.5KDa

＜PMW-201＞
Prestained Low range markers 250μl,Special Dye set,SDS-Dye（-DTT） 450μl,1M DTT 50μl
（バンドサイズ）114,84,47,31,26,17.4KDa

＜PMW-202＞
Prestained Broad range markers 250μl,Special Dye set,SDS-Dye（-DTT） 450μl,1M DTT 50μl
（バンドサイズ）273,114,84,61,47,39,31,26,17.4,8.6KDa

＜PMW-301＞
SDS-Dye（-DTT） 9ml,1M DTT 1ml 


※rangeの部分をクリックしていただくと取扱説明書(PDFファイル）をダウンロードしていただけます。
製品名『Sharpline^®  SDS-PAGE用分子量マーカーセット』

range	包装	Code No.	価格
Low range	100〜200回用	PMW-101	￥13,000
Broad range	100〜200回用	PMW-102	￥19,000
Prestained Low range	50〜100回用	PMW-201	￥13,500
Prestained Broad range	50〜100回用	PMW-202	￥19,500
Special Dye set	1Set	PMW-301	￥4,500

●ウエスタンブロット・ELISA用免疫反応促進試薬
『Can Get Signal^® Immunoreaction Enhancer Solution』

●ウエスタンブロット解析用マーカー（目的バンドと同時検出可能）
『CruzMarker^TM Molecular Weight Standards』

免疫沈降（IP）実験に朗報。IP抗体やProtein A/Gなどに由来するノイズをカット

免疫沈降実験において、沈降させたターゲットタンパク質をウェスタンブロッティング（WB）で検出する際、マトリックスから遊離したProtein A/GやIP抗体が検出されてしまい、目的タンパク質の検出が困難になることがありました。ExactaCruz^TMはそれらの問題を解決するために開発された免疫沈降及び検出試薬です。用いるIP及びWB抗体の組み合わせから使用する試薬を選択することができます。

IP抗体のH鎖とL鎖や、ProteinA/G等に由来するバンドを検出しません。
・WB抗体とIP抗体との組み合わせに応じてキットを選択することにより、IP抗体に起因するノイズを検出せずに、目的バンドを高感度に検出することができます。
　※マトリックスへの非特異吸着を回避するために、サンプルを必要に応じてPreclearing Matrixで処理すると良い場合があります。
 





<製品使用文献>
1) A.D. Amsel et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 105: 5117-5122. (2008)
   PMID: 18362350
2) M. Reeves et al., J Virol., 80: 9998-10009. (2006)
   PMID: 17005678
3) R. Efendiev et al., J. Biol. Chem., 283: 17561-17567. (2008)
　PMID: 18420589
4) S. Roger et al., J Neurosci., 28(25): 6393-6401. (2008) 
　PMID: 18562610
5) NX. Chen et al., Am J Physiol Renal Physiol., 292: F599-606. (2007)
　PMID: 16968889

	品名及び内容	WB抗体の免疫動物種	IP抗体の免疫動物種	包装	輸送・保存 温度	Code No.	価格
	ExactaCruzTM A 　・免疫沈降マトリックス（25％V/V） 2ml 　・WB用HRP標識プローブ（ExactaCruzTM probe）	Goat	Rabbit or Mouse	1kit	4℃	SASC45038	￥26,000
	ExactaCruzTM B	Mouse	Goat or Rabbit	1kit	4℃	SASC45039	￥26,000
	ExactaCruzTM C	Rabbit	Goat or Mouse	1kit	4℃	SASC45040	￥26,000
	ExactaCruzTM D	Goat	Goat	1kit	4℃	SASC45041	￥26,000
	ExactaCruzTM E	Mouse	Mouse	1kit	4℃	SASC45042	￥26,000
	ExactaCruzTM  F	Rabbit	Rabbit	1kit	4℃	SASC45043	￥26,000

品名をクリックするとデータシートをご覧いただけます。

：本キットのパーツは、有機水銀化合物であるチメロサールが防腐剤として含まれます。ご注意ください。      

品名及び内容	IP抗体の免疫動物種	包装	輸送・ 保存 温度	Code No.	価格
Preclearing Matrix A-Rabbit	ExactaCruzTM AでRabbit使用	1ml（25%V/V）	4℃	SASC45052	￥11,000
Preclearing Matrix A-Mouse	ExactaCruzTM AでMouse使用	1ml（25%V/V）	4℃	SASC45058	￥11,000
Preclearing Matrix B-Goat	ExactaCruzTM BでGoat使用	1ml（25%V/V）	4℃	SASC45053	￥11,000
Preclearing Matrix B-Rabbit	ExactaCruzTM BでRabbit使用	1ml（25%V/V）	4℃	SASC45059	￥11,000
Preclearing Matrix C-Goat	ExactaCruzTM CでGoat使用	1ml（25%V/V）	4℃	SASC45054	￥11,000
Preclearing Matrix C-Mouse	ExactaCruzTM CでMouse使用	1ml（25%V/V）	4℃	SASC45060	￥11,000
Preclearing Matrix D	ExactaCruzTM DでGoat使用	1ml（25%V/V）	4℃	SASC45055	￥11,000
Preclearing Matrix E	ExactaCruzTM EでMouse使用	1ml（25%V/V）	4℃	SASC45056	￥11,000
Preclearing Matrix F	ExactaCruzTM FでRabbit使用	1ml（25%V/V）	4℃	SASC45057	￥11,000

ユーザー様からの新着実施例が追加されました！　　　　　　　　　　　　　詳細はコチラ

特長１.　シグナルを増強・S/Nを改善
従来法に比べ数倍から数十倍の高いシグナルを得ることができます。特に反応性の低い抗体で顕著な効果を示す傾向があります。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　

特長2.　広い汎用性
ウェスタンブロッティング、ドットブロッティング、及びELISAなど幅広いアッセイに用いることができます。ペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、及び蛍光標識抗体など幅広い抗体での検出に適応できます。

特長3.　使いやすいReady-to-useタイプ
Ready-to-useタイプですので、製品をそのまま抗体反応液（希釈液）として用いるだけで効果が得られ大変簡便です。実験のステップ追加や操作時間の増加はございません。１次抗体用としてSolution 1、2次抗体用としてSolution 2を用います。ブロッキング液や検出試薬は、今までの条件をそのままご使用いただけます。

Can Getシリーズ実施例集を発刊いたしました！ 内容詳細はコチラからご覧いただけます。（PDFファイル） Can Getシリーズ実施例集2を発刊いたしました！ 内容詳細はコチラからご覧いただけます。（PDFファイル）

ユーザー様からの実施例

実施例5 ミリポア社タンパク質免疫検出装置「SNAP i.d.」と免疫反応促進試薬「Can Get Signal」を用いる迅速・高感度ウェスタンブロット

実施例4 細胞に発現するCytokeratin 19タンパク質の検出

実施例3 リン酸化Smadの検出

実施例2 ウェスタンブロットによる海馬内のNR2A（NMDA receptor subunit）の発現量の検出

実施例1 ウェスタンブロットによる新規癌遺伝子産物MM-1αの検出

実施例0  ウェスタンブロットによるリン酸化タンパク質の検出 情報誌UPLOADの記事はコチラからご覧いただけます。（※PDFファイル）Vol.77P9-10

実施例集

実施例2 ウェスタンブロッティングにおけるブロッキング条件の検討 情報誌UPLOADの記事はコチラからご覧いただけます。（※PDFファイル）Vol.80P15-16

実施例1 ウェスタンブロッティングとELISAにおける従来法との比較例 情報誌UPLOADの記事はコチラからご覧いただけます。（※PDFファイル）Vol.76P3-4

●本製品について
本製品はウェスタンブロット・ELISA等での「担体上の抗原」と抗体との反応に至適化されています。
●化学発光、化学発色、蛍光検出系のいずれにも使用できます。ペルオキシダーゼやアルカリフォスファターゼなどの標識抗体の活性にも影響を与えない成分から構成されています。
●２次抗体の後に使用するタイプの増感システムとの併用も可能です。
●ウェスタンブロット・ドットブロット・ELISA等で使用可能です。

●ビオチン・アビジン反応に関しまして
促進効果はございません。

●ブロッキング後の洗浄に関しまして
●１次抗体の希釈液とブロッキング液が同じ（もしくはかなり近い）場合は省略可能です。
●異なる場合は洗浄が必要になります。
※詳細はコチラからプロトコル（P5）（PDFファイル）をご覧ください。
●ユーザー様から『ブロッキング等の工夫で綺麗なデータを得ることができた』との
お声もいただいております。詳細はコチラから。

【ご使用方法解説ページ 】
●Can Get Signalシリーズ使用の指標
●ELISA
●ウェスタンブロット解析

【抗体実験解説書】
実施例を交えながら易しく解説しています。初心者の方から上級者まで役立つ情報が満載です。タイトルをクリックしていただくとダウンロードしていただけます。
Vol 3 『ウェスタンブロッティング・免疫組織染色編』※PDFファイル   

1)Proc Natl Acad Sci U S A, 104 ：7500-7505 (2007)
2)International Archives of Allergy and Immunology, 141： 322-330 (2006)
3)J. Neurochemistry, 98： 20-33 (2006)
4)J. Cell Biol, 175： 135-146 (2006)
5)Proc Natl Acad Sci U S A. 102：11663–11668 (2005)
6)The Plant Cell 17：389-403 (2005)
7)J. Biol. Chem., 280： 39436-39447, November 25 (2005)
8)Cancer Research 65： 2617-2625 (2005) 

品名をクリックしていただくとプロトコルをご覧いただけます。

品名	包装	温度	Code No.	価格
Can Get Signal® immunoreaction Enhancer Solution	Solution 1&2 各50m×l本	4℃	NKB-101T	\10,000
	Solution 1&2 各250ml×1本	4℃	NKB-101	\30,000
	Solution 1 250ml×１本	4℃	NKB-201	\17,000
	Solution 2 250ml×1本	4℃	NKB-301	\17,000

*いずれのSolutionも、0.01%以下のノニオン系界面活性剤を含みます。

専用のブロッキング剤を発売いたしました！ あわせてご使用いただくことで性能の向上が期待できます。

品名	包装	保存温度	Code No.	価格
PVDF Blocking Reagent for Can Get Signal	500ml	4℃	NYPBR01	￥13,500

『FAQ』
FAQ:Can Get Signal

『参考資料』
1.私にもできた Vol 3 『ウェスタンブロッティング・免疫組織染色編』
2.Western blotによるリン酸化タンパク質の検出（UPLOAD Vol. 77 p9-10）
3.各種免疫アッセイ(UPLOAD Vol. 78 p17-18)
4.ウェスタンブロッティングにおけるブロッキング条件の検討(UPLOAD Vol. 80 p15-16)

【初心者にもわかりやすい解説書】
「私にもできたシリーズ」※PDFファイル

免疫組織染色での免疫反応を至適化する試薬です。
バックグラウンドを下げる効果もあります。

ユーザー様からの新着実施例が追加されました！

 

Can Getシリーズ実施例集を発刊いたしました！ 詳細内容はコチラからご覧いただけます。（PDFファイル）

ユーザー様からの実施例

実施例8  ST2細胞におけるリソソームマーカーLAMP-1の検出

実施例7　ウシ受精卵における熱ショックタンパク質の発現と局在解析

実施例6  Schneider 2 (S2)のalpha-tubulin染色における従来法との比較実験

実施例5  ラット頚動脈バルーンインジャリーモデルでの新生内膜における                        R-Ras発現解析の従来法との比較検討

実施例4　アフリカツメガエルの卵巣染色での従来法との比較検討

実施例3　肝癌培養細胞のFOXO1を染色での従来法との比較検討

実施例2　CD133免疫染色における従来法との比較検討

実施例1　Olig2染色での従来法との比較検討

実施例0　蛍光染色実施例

実施例

実施例1　ABC染色例　（UPLOAD Vol. 80 p7）

●本製品について
本製品は組織切片や細胞などの「生体サンプル上の抗原」と抗体との反応に至適化されています。
●ABC法や、ポリマーコンプレックス法などの増感システムとの併用も可能です。
●パラフィン包埋切片、凍結切片、細胞などで使用可能です。

●Solution AとBについて
Solution AとBは免疫反応の促進作用が異なります。どちらの溶液が適しているかは両方がセットになっておりますStarter setを用いて予備検討いただくことをお薦めいたします。ご検討の際は
１次抗体・２次抗体ともSolution A
１次抗体・２次抗体ともSolution B
の２種類のパターンでご検討ください。

※ウェスタンブロッティング用の試薬Solution 1（１次抗体用）、Solution 2（２次抗体用）とは異なりますのでご注意ください。


【関連記事】
●Can Get Signal®シリーズ使用の指標
●免疫組織染色について

【参考資料】
●UPLOAD記事（PDFファイル）
Can Get Signal^® immunostainを用いた蛍光免疫染色（UPLOAD Vol.81 19-20）
●私にもできたシリーズ（PDFファイル）
私にもできた Vol 1 『ウェスタンブロッティング・免疫組織染色編』

Moriguchi K, et al.,Plant Cell.17(2):389-403(2005)

（製品名をクリックしていただくとプロトコルをご覧いただけます）

品名	包装	保存温度	Code No.	価格
Can Get Signal® immunostain	Starter set Solution A&B 各5ml×l本	4℃	NKB-401	￥12,000
	Solution A 20ml×1本	4℃	NKB-501	\30,000
	Solution A 20ml×4本	4℃	NKB-501X4	\70,000
	Solution B 20ml×1本	4℃	NKB-601	\30,000
	Solution B 20ml×4本	4℃	NKB-601X4	\70,000

*いずれのSolutionも、0.2%以下のノニオン系界面活性剤を含みます。


【関連製品】
ELISA･ウェスタンブロッティング用はこちら

【FAQ】 
Can Get Signal^® immunostain FAQ