特長２.　伸長時間を短縮<30sec./kb>　（長いターゲットでより便利になりました）
伸長時間を、従来品の60sec./kbから30sec./1kbに短縮。長いターゲットでより便利になりました。


特長３.　様々なプライマーで同一温度サイクル条件を実現

実施例1. Total RNA からの様々な遺伝子の全長ORFの増幅
実施例2. 微量Templateからの増幅
実施例3. 様々なサイズのターゲットにおける増幅効率･伸長性の比較



＜ワンポイントアドバイス＞
●PCR産物のクローニング
本酵素のPCR産物は平滑化されており、平滑末端クローニング法によってクローニングできます。その際ベクター側を脱リン酸化処理している場合、PCR産物のリン酸化を行うか、5'リン酸基のついたプライマーを使用する必要があります。　また、本酵素のPCR産物は平滑化されているため、直接TAクローニングすることはできません。以下の手法を用いる専用のTAクローニングキット「TArget Clone(TM) -Plus-」をご使用ください。

*TArget Clone -Plus-(Code No. TAK-201）に含まれています。
**Ligation high Ver.2 (Code No. LGK-201)を推奨いたします。


＜ご注意＞
●プライマーの設計
3'側にミスマッチのあるプライマーは、本酵素によって校正を受ける場合があります。

一口メモ①ポリメラーゼについて
PCRに用いられるDNA polymeraseは大きく2種類に分けることができます。一つは、好熱細菌から分離されたpolI型と呼ばれるポリメラーゼで、TaqやTth　DNA polymeraseがこれにあたります。もう一つは、超好熱Archaeaから分離されたα型と呼ばれるポリメラーゼで、KOD やPfu DNA polymeraseがこれに相当します。α型酵素は、polI型酵素にない、3'→5'エキソヌクレアーゼ活性を有しています。この活性は、Proof-reading活性とも呼ばれ、PCRの正確性に深く関与します。KOD DNA polymeraseはこのProof-reading活性が強く、大変高い正確性を示します。ただ、一般的にこの活性を有する酵素はPCRパフォーマンスが悪いと言われています。KOD -Plus- Neoは、新規伸長エンハンサーの応用、ホットスタート法、及びバッファー組成の改良によってPCR効率を向上させています。

 一口メモ②　ホットスタートとは？
　PCR反応溶液を調製する作業を室温で行うと、調製工程においてもポリメラーゼが働いてしまいます。室温ではプライマーの特異性が低くなっているため、非特異反応の原因となる副反応が起こりやすくなることが知られています。また、KOD DNA polymeraseは強い3'→5'エキソヌクレアーゼ活性(Proof reading活性)を有しているため、その活性も副反応の大きな原因となります。ホットスタート法は高温になった段階でポリメラーゼが働くようにする方法で、今までいくつかの方法が考案されています。もっとも厳格にその制御を行う方法が中和抗体を用いる方法です。KOD -Plus- Neoには2種類の抗KOD DNA polymerase抗体が混合されており、常温でのポリメラーゼ、及びProof-reading活性を完全にブロックします。このブロックは、PCRの最初の変性工程で抗体が完全に失活するため、PCRへの影響は全くありません。



1）M. Takagi et al., Appl. Environ. Microbiol., 63: 4504−4510（1997）
2）H. Hashimoto et al., J. Biochem.（Tokyo）,125: 983−986（1999)
3）H. Mizuguchi et al., J. Biochem.（Tokyo）,126: 762−768（1999）
4）M. Nishioka et al., J. Biotechnol. 88, 141-149 (2001).
5) H. Hashimoto et al., J. Mol. Biol.,306: 469−477（2001）
6）T. Imanaka, et al. J. Chin. Inst. Chem. Engrs., 32, 277-288 (2001)



（製品名をクリックしていただくと取扱説明書をご覧いただけます。）

品名	包装	保存温度	Code No.	価格
KOD -Plus- Neo	200Units×1本[200回用]	-20℃	KOD-401	￥30,000
	(200Units×1本)×5[1,000回用]	-20℃	KOD-401X5	￥120,000

品名	包装	輸送・保存温度	Code No.	価格
部位特異的変異導入キット KOD -Plus- Mutagenesis Kit	20回	-20℃	SMK-101	￥38,000
KOD用TAクローニングキット TArget CloneTM -Plus-	10回用	-20℃	TAK-201	￥16,000

リアルタイムPCRの性能・コスト面について全面的に見直しました。性能・コスト等でお困りのすべての方に自信をもっておすすめいたします

特長1 高い特異性
組成最適化により、PCRの特異性が向上。非特異反応の低減によって、SYBR^®  Green I、およびTaqMan^® アッセイにおいて、低コピー数のターゲットの検出感度が向上しました。


特長2 様々なターゲットを均一に検出
ターゲットごとのPCR効率のばらつきを最小限に抑える効果のある新規エンハンサーを採用*。（*特許出願中）


特長3 広いレンジで検出可能
特異的(特長1)、かつ高効率(特長2)な増幅により、広い測定レンジでの解析が可能になりました。

特長4 様々な機器に対応
一般的なブロックタイプの機器(Fast Modeにも対応)のほか、ガラスキャピラリーを用いる高速サイクラーにも対応しています。また、50× ROX reference dyeが別添付されているため、パッシブリファレンスを使用する機器 (Applied Biosystems社製機器、Stratagene社製機器など) においても、各機種の特性に応じた最適なROX濃度でご使用いただけます。

特長5 高速ホットスタート
抗Taqポリメラーゼ抗体を用いるホットスタートシステムを採用しています。抗体は加温により速やかに失活するため、最初の変性時間を短時間に設定できます。

特長6 高いコストパフォーマンス
実験のランニングコストを大幅に抑えることが可能になりました。

【対応機器一覧】

Applied Biosystems	ABI PRISM 7000	●
	ABI PRISM 7700	●
	Applied Biosystems 7300	●
	Applied Biosystems 7500	●
	Applied Biosystems 7500 Fast	●
	Applied Biosystems 7900HT	●
	Applied Biosystems Step OneTM	○
	Applied Biosystems Step One PlusTM	○
Roche Diagnostics	LightCycler 1.x	●
	LightCycler 2.0	●
	LightCycler 480	●
Bio-Rad/MJ	iCycler iQ	○
Stratagene	Mx3000P	●
	Mx3005P	●
	Mx4000	○
TaKaRa	Thermal Cycler Dice	●
BioFlux	Line Gene	●

●：使用実績あり
○：使用可能（使用実績なし）*
*試薬サンプルを準備しております。お問い合わせください。
 

●機器別クイックリファレンス 　　【SYBR® Green I アッセイプロトコール】

Applied Biosystems 7900HT [PDF]

Applied Biosystems 7500 [PDF]

Applied Biosystems 7500 Fast [PDF]

Roche LightCycler 1.x [PDF]

Roche LightCycler 2.0 [PDF]

(品名をクリックすることで取扱説明書をダウンロードすることができます）

品名	包装	保存 温度	Code No.	価格
THUNDERBIRDTM Probe qPCR Mix	1ml x 1本   [40回用*] 1.67ml x 3本   [200回用*] (1.67ml x 3本)×5   [1000回用*]	-20℃	QPS-101T QPS-101 QPS-101X5	￥8,500 ￥29,000 ￥133,000
THUNDERBIRDTM SYBR® qPCR Mix	1ml x 1本   [40回用*] 1.67ml x 3本   [200回用*] (1.67ml x 3本)×5   [1000回用*]	-20℃	QPS-201T QPS-201 QPS-201X5	￥8,500 ￥29,000 ￥133,000

*包装の欄に記載の反応回数は、50μl反応時のものです。
※50×ROX Reference Dyeがマスターミックスとは別容器で供給されます。
※大容量版(QPS-101X5およびQPS-201X5)は、QPS-101もしくはQPS-201の5セット組です。
※TaqMan^®は、Roche Molecular Systems Inc.の登録商標です。
※SYBR^®は、Molecular Probes Inc.の登録商標です。

品名	内容	保存 温度	Code No.	価格
THUNDERBIRDTM Probe qPCR/RT Set	THUNDERBIRDTM Probe qPCR Mix(200回用）とReverTra Ace®　qPCR RT Kit (200回用）とのセット	-20℃	QPS101/ FSQ101	￥63,000
THUNDERBIRDTM SYBR® qPCR/RT Set	THUNDERBIRDTM SYBR® qPCR Mix(200回用）とReverTra Ace® qPCR RT Kit (200回用）とのセット	-20℃	QPS201/ FSQ101	￥63,000

※本品は、ReverTra Ace qPCR RT Kit (￥38,000→￥35,700)とTHUNDERBIRD qPCR Mix (￥29,000 → ￥27,300）のセットです。

実施例集（タイトルをクリックしていただきますと詳細をご覧いただけます）

実施例5：他社Taq Master Mixとの性能比較

PCR産物をそのまま制限酵素処理可能です！  実施例4：PCR産物の直接制限酵素処理について

実施例3：コロニーダイレクトPCRを用いたインサートチェック

実施例2：ヒトp53遺伝子 （2.9 kb）の増幅

実施例1：ヒトβ-globin(3.6Kb)の増幅

作成中

●ホットスタート法
●コロニーダイレクトPCR


1)F. C. Lawyer et al., J. Biol. Chem., 264: 6427-6437 (1989)
2）Kellogg,D.E. et al.,BioTechniqus,16:1134（1994）

（品名をクリックしていただくとプロトコルをご覧いただけます）

品名	包装	保存温度	Code No.	価格
Quick TaqTM HS DyeMix	1.25ml×2本 （100回用）*	-20℃	DTM-101	￥9,800
	(1.25ml×2本)×10 （1,000回用）*	-20℃	DTM-101X10	￥44,000

*50μlで反応した場合の反応回数を記載しています。
  

品名	包装	保存温度	Code No.	価格
高効率TAクローニングキット TAreget CloneTM	10回用	-20℃	TAK-101	￥12,000
rTaq DNA Polymerase	250U × 1本	-20℃	TAP-201	￥9,500
ホットスタート用抗Taq抗体 anti-Taq high	100μl× 1本	-20℃	TCP-101	￥16,000

製品FAQ

250Uで￥9,500の大幅価格改定！さらにお求め安くなりました！ ※チラシ形式のPDFファイルはこちらからダウンロードしていただけます。

本酵素は、Thermus aquaticus YT-1よりクローニングされたr(リコンビナント)Taq DNA polymeraseです。スタンダードなPCRには現在でも欠かすことのできないPCR酵素です。
Mg含有タイプでは、Mg添加量の検討が可能です。
ホットスタート用中和抗体「anti-Taq high」 を混合することで、
ホットスタート法を用いることができます。


実施例1. ゲノムDNAのPCR例
HumanゲノムDNA(50ng)を鋳型として、Primer 20pmoles、酵素1.25Uの条件を用い、50μlの反応系で増幅を行いました。Mg²⁺とdNTPsの終濃度は、それぞれ1.5mMと0.2mMとし、アニーリング温度を55℃としました。その結果、180bpから1.3kbまでのターゲットを効率良く増幅することができました。


※その他ワンポイントアドバイス等はコチラからご覧いただけます。


1)F. C. Lawyer et al., J. Biol. Chem., 264: 6427-6437 (1989)
2)T. Nagahama et al., Stem Cells, 19: 425-435 (2001)

品名	包装	保存温度	Code No.	価格	新価格
Taq DNA Polymerase （Mg別添タイプ）   ・rTaq DNA Polymerase   ・10×Buffer   ・25mM MgCl2   ・2mM dNTPs	250Units×1本	-20℃	TAP-201	￥25,000	￥9,500
	250Units×5本	-20℃	TAP-205	￥99,000	販売中止
	250Units×11本	-20℃	TAP-202	￥200,000	販売中止
Taq DNA Polymerase （Mg含有タイプ）   ・rTaq DNA Polymerase   ・10×Buffer   ・2mM dNTPs	250Units×1本	-20℃	TAP-211	￥25,000	￥9,500
	250Units×5本	-20℃	TAP-215	￥99,000	販売中止
	250Units×11本	-20℃	TAP-212	￥200,000	販売中止

※5本、10本の包装は販売中止になりました。小包装をお求め下さい。

マルチプレックスPCRの条件検討に最適です！ PCR/MPCR Optimizer Kit-I

※製品名をクリックしていただくと製品詳細をご覧いただけます。

品名	包装	保存温度	Code No.	価格
ホットスタート用抗体 anti-Taq high	100μl	-20℃	TCP-101	￥16,000
高効率TAクローニングキット TArget CloneTM	10回用	-20℃	TAK-101	￥12,000

新着実施例が追加されました！ 実施例23：KOD FXを用いたコロニーPCRによる各種細菌DNAの検出

特長1. 高い増幅成功率(弊社No.1)
GCリッチターゲットや細胞懸濁液などのクルードサンプルなどからも高い成功率で増幅が可能です。（実施例はコチラから）

特長2. 抜群の増幅効率
高い収量が得られるため、少ない鋳型量からでも増幅が可能です。
（実施例はコチラから）

特長3. 優れた伸長性
λDNAから40kb、ヒトゲノムDNAから24kb、cDNAから13.5kbの増幅が可能であることを確かめています。（実施例はコチラから）

特長4. ホットスタートでPCRパフォーマンス向上
2種類の坑KOD抗体を酵素に混合することによって、非特異反応の原因となる常温下でのPolymerase活性と3'→5' Exonuclease活性を抑制しています。抗体はPCRの最初の変性ステップで失活し、増幅反応には影響を及ぼしません。

【KOD FX実施例集】 詳細内容はコチラからご覧いただけます。（※PDFファイル）  【KOD FX実施例集2】 詳細内容はコチラからご覧いただけます。（※PDFファイル）

（※タイトルをクリックしていただくと詳細をご覧いただけます。）

ユーザー様からいただいた実施例

実施例25：KOD FXを用いたタバコ葉からの直接PCR

実施例24：KOD FXを用いた爪からの直接PCR

実施例23：KOD FXを用いたコロニーPCRによる各種細菌DNAの検出

実施例22：KOD FX を用いた麹菌Aspergillus oryzaeの遺伝子破壊の確認

実施例21：KOD FX を用いた淡水産シオグサ属藻類（緑藻）のDNA断片増幅

実施例20：KOD FX を用いたマウス濾紙血によるPCR解析

実施例19：KOD FX を用いたキイロショウジョウバエの羽からの簡便なロングPCR法

実施例18：ホルマリン固定パラフィン包埋切片から抽出したDNAの解析

実施例17：カビ（Aspergillus oryzae）からのダイレクトPCR

実施例16：病原酵母Cryptococcus neoformans菌体（コロニー）からのダイレクトPCR

実施例15： マウステール（尾）ライセートからのPCR

実施例14： KOD FXを用いた緑膿菌DNAの遺伝子増幅

実施例13： DGGE法を用いた沿岸海域に生息する植物プランクトン(クリプト藻)の多様性の解析

実施例12： トランスジェニックラット血液（ろ紙血）からのＧＦＰ遺伝子の検出

実施例11： ヒト糞便から精製したDNAを用いたHelicobacter pylori cagA遺伝子の増幅

実施例10： 新規イネOsSRS3遺伝子の５´領域の単離

実施例9： コロニーPCRによる酵母形質転換の確認

実施例8:  ヒトSF-1cDNA（GC-rich）の増幅

実施例7： ヒトCYP11A1遺伝子のプロモーター領域の増幅

実施例6： 植物発現プロモーターに連結させた植物ウイルスcDNA増幅

実施例5： Human転写因子（HNF3b, C/EBPβ, FTFおよび HNF6）cDNAとmiR-17,18,19,20,92領域genomic DNAの増幅

実施例4： c-mos遺伝子の増幅（変異導入のためのPCR）

実施例3： BMP-2遺伝子の増幅(GC-rich領域含む）

実施例2： Chick GAD67プロモーター領域のクローン化

実施例１： マウスゲノムDNAを用いたPGK neo遺伝子の検出

クルードサンプルからの直接増幅例

実施例7： ヒト毛根サンプルからの簡便なPCR増幅例

実施例6： トランスジェニックマウステールからのジェノタイピング例

実施例5： マウステール溶解液を直接用いたトランスジェニックマウスのジェノタイピング

実施例4： 植物サンプル（葉・米粒）からのPCR増幅例

実施例3： 培養細胞（細胞懸濁液）からの増幅例

実施例2： 血液(Whole Blood)サンプルからの増副例

実施例1： マウステールライセートからの増幅例

難しい配列の増幅例

実施例1： プライマー設計に制限がある場合の増幅例

実施例2： GC richターゲットの増幅

増幅効率に関する実施例

少ない鋳型量（0.1ng〜100ng）からの増幅例

Long Targetの増幅例

実施例1： Long Target（〜40Kb)の増幅例

実施例2： 真核細胞最長DMD遺伝子（13.5Kb）のPCRクローニングに挑戦

Primer設計条件の検討例

long PCRにおけるPrimerの精製グレード及び鎖長の影響

KOD FXはKOD DNA polymeraseをベースとして開発されたPCR試薬です。KOD DNA polymeraseは強い3'-5'エキソヌクレアーゼ活性を有しており、KOD -Plus-やKOD -Plus- Ver.2と同じく、増幅産物の末端は平滑化されています。よって、通常の条件ではTAクローニングできません。専用のTArget Clone -Plus-を用いることにより、効率よくTAクローニングすることが可能です。

1）M. Takagi et al., Appl. Environ. Microbiol., 63: 4504−4510（1997）
2）H. Hashimoto et al., J. Biochem.（Tokyo）,125: 983−986（1999)
3）H. Mizuguchi et al., J. Biochem.（Tokyo）,126: 762−768（1999）
4）H. Hashimoto et al., J. Mol. Biol.,306: 469−477（2001）
5）M. Watanabe et al., J. Biochem.（Tokyo）,131: 183−191（2002）
6）H. Terasaki et al., Intl. J. Mol. Med., 9: 107−112（2002）
7）N. Nozawa et al., Virology, 379: 45−54（2008）
8）M. Sasaki et al., Yeast, 25: 673−679（2008）

 

（品名をクリックすることで、取扱説明書をダウンロードいただけます）

品名および内容	包装	保存 温度	Code No.	価格
KOD FX   KOD FX(1U/μl)   2×PCR Buffer for KOD FX   2mM dNTP	200U×1本	-20℃	KFX-101	￥35,000
	（200U×1本）×5	-20℃	KFX-101X5	￥140,000
	（200U×1本）×10	-20℃	KFX-101X10	￥260,000

（品名をクリックすることで、取扱説明書をダウンロードいただけます）

品名	包装	保存温度	Code No.	価格
高効率TAクローニングキット TArget CloneTM -Plus-	10回用	-20℃	TAK-201	￥16,000
KOD FX専用バッファー 2×PCR Buffer for KOD FX	1.7ml×3本	-20℃	KFX-1B	￥5,000

＜関連製品記事＞
KOD -Plus- / KOD -Plus- Ver.2
TArget Clone^TM -Plus-

＜FAQ＞
FAQ: KOD FX

＜チラシ記事＞
記事はPDFファイルになっております。下記のファイルには上記のデータが含まれております。また、記事内のキャンペーン案内は終了しております。あしからずご了承下さい。
●KOD FXガイド記事
●KOD FX実施例集

実施例1:当社従来品との感度比較
キットに添付のポジティブコントロールRNA*とプライマーセットを使用し、
ヒトG3PDH mRNAの約450bpの領域を標的としたRT-PCRを行いました。
RT-PCR Quick Master Mixは、当社従来品と比べて2桁以上の高感度を示しました。

B: ブランク反応
【サンプル】ヒトG3PDH mRNA* (10⁶ ~ 10²コピー/50μl反応系)
*in vivo transcriptionにて調整しました。

【プライマー】
Primer(F): 5'-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3' (20mer)
Primer(R): 5'-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3' (20mer)
             
【サイクル条件】
90℃ 0:30 →60℃ 30:00 →94℃ 1:00 
→ (94℃ 0:30 → 60℃ 0:30 → 72℃ 1:00) x 40サイクル→72℃ 1:00

実施例2: mRNAを用いたcdc2遺伝子の検出
ヒト培養細胞由来mRNA( 5ng、0.5ng）を鋳型とし、
ヒトcdc2のORF全長(約900bp)をターゲットとしたRT-PCRを行いました。
cdc2はセルサイクルに関わるタンパク質をコードしています。
その結果、当社従来品では検出できなかったターゲットが、
RT-PCR Quick Master Mixによる反応では良好な増幅を示すことが分かりました。

【プライマー】
Cdc2-F : 5'-CCATACCATTGACTAACTATGGAAGAT-3' (27mer)
Cdc2-R : 5'-GTCAGAAAGCTACATCTTCTTAATCTG -3' (27mer)
             
【サイクル条件】
90℃ 0:30 →60℃ 30:00 →94℃ 1:00 
→(94℃ 0:30 → 60℃ 0:30 → 72℃ 1:00) x 40サイクル→72℃ 1:00


●rTth DNA polymeraseは、好熱細菌Thermus thermophilusから分離されたpol I型DNA polymeraseです。Mn^2＋イオン存在下で逆転写活性を示すユニークな性質を有しています。
(参考文献) Biochemistry, 30, : 7661-7666 (1991)
※本酵素の基本特許は弊社が有しています。
 
<ワンポイントアドバイス＞
●プライマーの設計
RT-PCR用プライマーの設計方法はコチラからご覧いただけます。
 
●逆転写反応時のプライマーについて
PCR用のReverse Primerがそのまま逆転写用のプライマーとなります。
別途添加する必要はありません。
また、Oligo dTやRandom Primerは使用できません。

●RT-PCR産物のクローニング
本キットではMn^2＋の存在下でPCRを行うため、
Mg^2＋を用いる通常のPCRに比べさらに正確性が低下する傾向にあります。
よって本製品は、クローニング用PCRには適しません。
クローニングには高正確性RT-PCRキット『ReverTra -Plus- ^TM』をお薦めいたします。

●基本反応条件等はコチラからご覧いただけます。


1) Daigo D. et al., Plant Cell Physiol., 41:458-464 (2000)
2) Katayama K. et al., Biochem. J., 329: 647-652 (1998)

（品名をクリックすることで、取扱説明書をダウンロードいただけます）
（2-メルカプトエタノール）

品名および内容	包装＊	保存温度	Code No.	価格
RT-PCR Quick Master Mix    2x RT-PCR Quick Master Mix    50mM Mn(OAc)2    Positive Control RNA (human G3PDH)    Positive Control Primer Set     Nuclease-free Water	50回用	-20℃	PCR-311	￥45,000

＊1反応50μlとした場合の使用回数を記載しています。
 

ラベルライセンスについてのご説明

プライマー
『RT-PCR用プライマーリスト』

ヒト正常組織/細胞由来の高純度Total RNA
『Total RNA (Tissue＆Cell)』

「PCR実験関連情報」
●RT-PCRについて
●PCR Polymerase選択の指標
●DNA Polymeraseについて
●各PCR用Polymeraseの酵素的性質
●Exonuclease活性について　
●TdT(Terminal deoxynucleotidyl transferase)活性について
●ホットスタートについて
●Bufferによる性能の向上について
●PCRトラブルシューティング

cDNAを鋳型とするTaqベースの高効率リアルタイムPCR製品はこちらから詳細をご覧いただけます。

特長1　高性能かつハイスループット
逆転写反応とPCRとを同一の反応系で連続的に行う『1酵素・1ステップ系』であり、RTaseとTaqを用いた『2酵素1ステップ』系などに比べ、多検体解析実験に適しています。　　　　　　　　　特長2　難しい配列にも対応
逆転写反応を高温で実施できるため、立体構造をとりやすい鋳型RNAの検出に適しています。またTth DNA polymeraseはGC-richなターゲットの検出にも有効です。

特長3　高い特異性
抗体を用いたホットスタートシステムを採用しており、非特異反応を抑制します。

特長4　幅広い装置でご使用いただけます
汎用PCRチューブ（プレート）、およびガラスキャピラリーを用いるタイプのリアルタイムPCR機器に対応します。また、本試薬はパッシブリファレンス色素が混合されており、蛍光色素での補正が必要な機器へも対応いたします。
※弊社で実績のある機器はコチラからご覧いただけます。

実施例1　『2-step系（RTase+Taq）』との相関性の検討

一般的な2-step法を用いるリアルタイムPCR解析法との相関性を各種ヒト組織由来RNAをサンプルとして、プロテインキナーゼδ(PKCδ）の発現解析により比較しました。
黄色のバーは、本製品を用いた定量結果であり、左方が50ng、右側が200ngのTotal RNAを用いて得られた結果を示しています。青色のバーは弊社高効率逆転写キット『ReverTra Ace -α-^®』とTaqベースのリアルタイムPCR試薬『SYBR^® Green Realtime PCR Master Mix -Plus- 』を用いて2Step系で検出を行った結果を示しています。
その結果、1Step系の本製品を用いることで、2Step系と同等な結果を迅速に得ることができることが分かりました。
※本実施例の詳細記事はコチラから

　　　　　図　 1-step系と2-step系の定量値の比較

実施例2　TaqMan® プローブアッセイにおける性能比較 　　　　　　　RNA-directTMVS 2酵素・1ステップ（装置：BioFlux社 Line Gene使用）

mRNAを鋳型とした、Taq＋RTase混合型であるA社試薬（２酵素１Step系）と比較実験をおこないました。ヒト培養細胞由来mRNA（10ⁿ倍希釈系列（n=2））を鋳型とし、TaqMan^® プローブアッセイによるβアクチンmRNAの検出を行いました（10⁰希釈の反応液20μlに5ngのPoly（A）^＋ RNAが含まれるように希釈）。その結果、RNA-direct^TM Realtime PCR Master Mixによる反応では、A社試薬推奨の反応条件においても、立ち上がりの早さと直線性において優れた結果を示しました。

実施例3　SYBR® Greenアッセイおける直線性検討 　　　　　　RNA-directTMVS 2酵素・1ステップ（装置：ABI 社 PRISM® 7900HT使用）

　HeLa細胞由来のTotal RNA（10ⁿ倍希釈系列（n=2））を鋳型とし、SYBR^® GreenアッセイによるβアクチンmRNAの検出を行いました（10⁰希釈の反応液20μlに75ngのTotal RNAが含まれるように希釈）。
その結果、Taq＋RTase混合型であるB社キットと比較して、RNA-direct^TM SYBR^® Green Realtime PCR Master Mixによる反応では、少なくとも7オーダーの希釈系列において、高い相関性を示しました。

実施例4　SYBR® Greenアッセイにおける性能比較 　　　　　　　RNA-directTMVS 1酵素・1ステップ（装置：Roche社 LightCyclerTM使用）

ヒト培養細胞由来Poly（A）^＋RNA（10ⁿ倍希釈系列（n=2））を鋳型とし、SYBR^® GreenアッセイによりG3PDH mRNAの検出を行いました（10⁰希釈の反応液20μlに5ngのPoly（A）^＋ RNAが含まれるように希釈）。
 その結果、同じくTth DNA Polymeraseを使用したC社試薬と比較して、RNA-direct^TM  SYBR^® Green Realtime PCR Master Mixによる検出では、立ち上がりの早さ、シグナルの強度、及び検出感度において大きく上回る性能を示しました。

●保存について
長期保存の場合は−20℃（遮光）保存をお薦めしますが、短期間に連続使用する場合、3週間程度であれば4℃（遮光）保存可能です。

●プライマーの設計について
コチラご参照ください。

●逆転写反応時のプライマーについて
PCR用のReverse Primerがそのまま逆転写用のプライマーとなります。
別途添加する必要はありません。また、Oligo dTやRandom Primerは使用できません。

●サンプル添加量について
10μlなどの少量で反応させる場合は、サンプル添加量を1μlなどの極少量にせず、希釈して2μl程度添加することにより、ピペット誤差が抑えられ良好な結果を得ることができます。

●パッシブリファレンス色素に関しまして
あらかじめ混合されています。プレートタイプのPCR機器にそのままご使用いただけます。また、パッシブリファレンス色素を使用しないPCR機器への影響もありません。

●マンガン溶液に関しまして
RNA-direct^TMRealtime PCRシリーズには、必要量の酢酸マンガン溶液が別チューブ（オレンジのラベル）で添付されています。

●機器に関しまして
弊社で取り扱っております核酸増幅リアルタイムモニタリング装置BioFlux社LineGeneをご使用いただけますと、反応液量10μlからの正確なアッセイが可能ですので、よりコストパフォーマンスの高い解析が可能となります。LineGeneは、訪問デモサービスも行っております。お気軽にご相談ください。

Biochemistry, 30, : 7661-7666 (1991) 

（製品名をクリックしていただくと取扱説明書がご覧いただけます）

品名	包装*	保存 温度	Code No.	価格
One-step qPCR Kit RNA-directTM Realtime PCR Master Mix （TaqMan® アッセイ・プローブアッセイ用）	40回（0.5ml×2）	-20℃	QRT-101T	￥17,000
	100回（0.5ml×5）	-20℃	QRT-101	￥33,000
	500回（0.5ml×25）	-20℃	QRT-101X5	￥150,000
One-step qPCR Kit RNA-directTM  SYBR®Green Realtime PCR Master Mix （SYBR® Greenアッセイ用）	40回（0.5ml×2）	-20℃	QRT-201T	￥17,000
	100回（0.5ml×5）	-20℃	QRT-201	￥33,000
	500回（0.5ml×25）	-20℃	QRT-201X5	￥150,000

ラベルライセンスについてのご説明

*1反応50μlとした場合の使用回数を記載しています。
※LightCycler^TMは、Idaho Technology Inc.及びRoche Molecular Systems Inc.の商標です。
※SYBR^® は、Molecular Probes Inc.の登録商標です。
※ABI PRISM^® は、The Perkin-Elmer Corporationの登録商標です。

「FAQ」
RNA-direct^TM Realtime PCR Master Mix FAQ

「リアルタイムPCR関連記事」
●RT-PCRについて
●検出方法について
●プライマー設計について
●相対定量の考え方について

「リアルタイムPCR解説書」※タイトルをクリックしていただくとダウンロードできます（PDFファイル）
●私にもできた！ライフサイエンス実験シリーズ
『リアルタイムPCRに挑戦』

 高性能かつコストパフォーマンスに優れるリアルタイムPCR用試薬です。
『Realtime PCR Master Mixシリーズ』はTaq DNA polymeraseをベースとして開発された、汎用性の高いリアルタイムPCR用の2×マスターミックスです。再現性に優れた良好な結果を得ることができます。cDNAやDNAをサンプルとしたリアルタイムPCR解析に最適です。本シリーズはTaqMan^® アッセイ（プローブアッセイ）用、及びSYBR^® Greenインターカーレーションアッセイ用キット（２種類）の計３種類がございます。以下の表をご参考にお選びください。
また、cDNAサンプル合成には、弊社リアルタイムＰＣＲ用cDNA合成キット『ReverTra Ace qPCR RT Kit』を本製品とセットで用いることで、より信頼性の高いデータを得ることが可能です（他の各種逆転写試薬もご使用いただけます）。

製品名	用途	パッシブリファレンス対応	ガラスキャピラリー対応	リライアビリティー
SYBR® Green Realtime PCR Master Mix	インターカレーターアッセイ	○	○	☆☆☆
特異性向上！ SYBR® Green Realtime PCR Master Mix-Plus-	インターカレーターアッセイ	○	○	☆☆☆☆
Realtime PCR Master Mix	TaqMan®・プローブアッセイ	○	○	☆☆☆

RNAをサンプルとして、1Stepで迅速に解析されたい場合は、 １酵素・１ステップ系試薬『RNA directTMシリーズ』をお薦めいたします。

特長1　簡単・便利
2×マスターミックスの状態ですので、プライマーやプローブと蒸留水、サンプルを混合していただくだけですぐにPCRが可能です。

特長2　高い特異性
非特異反応を抑えるため、抗Taq抗体によるホットスタート法を採用しています。また、化学修飾法に比べTaq DNA polymeraseが迅速に再活性化するため、アッセイ時間も短縮できます。

特長3　幅広い機器でご使用いただけます
パッシブリファレンスを含有しており、ABI PRISM^® シリーズ（Applied Biosystems社）等にも対応しております。また、ガラスキャピラリーを用いるLightCycler^TM（Roche Diagnostics社）等にも対応可能です。

※弊社で実績のある機器はコチラからご覧いただけます。

特長4　高いリライアビリティー
【SYBR^® Green Realtime PCR Master Mix -Plus-】
バッファー組成を最適化することにより、インターカレーターアッセイ時にしばしば問題となるプライマーダイマーなどの非特異反応を低減させることに成功しました。また、PCR反応の特異性と再現性が向上し、より信頼性の高いリアルタイムPCR解析が可能となりました。

♪弊社リアルタイムＰＣＲ用cDNA合成キット『ReverTra Ace qPCR RT Kit』との 併用例はコチラからご覧ください。

実施例1  SYBR® Greenアッセイ系での他社品との反応性比較（装置：BioFlux社 Line Gene使用）

SYBR^® Greenアッセイ系の他社試薬と反応性の比較を行いました。 ヒトゲノムDNAを10倍ずつ段階希釈(30ngから3pgまでの5水準）したものをサンプルとして、β-actin遺伝子配列をターゲットとするPCRを実施しました。その結果、本製品を用いた場合増幅効率・立ち上がりの点で優れていることが分かりました。また、プライマーダイマーの生成も顕著ではありませんでした。

実施例2  インターカレーターアッセイの検討（装置：Roche社 LightCyclerTM使用）

弊社逆転写キットReverTra Ace -α-^®を使用し、HeLa細胞由来Total RNA（100ng)を鋳型としてrandom primerにて1st strand cDNA合成を行った後、10倍希釈をスタートとして5倍ずつ段階希釈し、β-actin遺伝子の検出しました。その結果、いずれの濃度でも良好な増幅曲線を得ることが出来ました。

実施例3  他社品との性能比較【インターカレーター編】（装置：BioFlux社 LineGene使用）

げっ歯類由来ゲノムDNA （10ⁿ倍希釈系列、10ng、1ng、0.1ng、0.01ng（n=2））を鋳型とし、インターカレーターアッセイによるターゲット遺伝子（約80bp）の検出を行いました。その結果、A社試薬では、非特異的増幅、及びプライマーダイマーの生成が認められましたが、SYBR^® Green Realtime PCR Master Mix -Plus-では、良好な増幅が確認できました。また、Ct値の間隔も、等間隔であり、ダイナミックレンジ（測定可能範囲）も広い傾向が認められました。

実施例4  TaqMan® アッセイの検討（装置：ABI PRISM ® 7700使用）

弊社逆転写キットReverTra Ace -α-^®を使用し、HeLa細胞由来Total RNA（100ng)を鋳型としてrandom primerにて1st strand cDNA合成を行った後、10倍希釈をスタートとして5倍ずつ段階希釈し、アプライドバイオシステムズ社Pre-Developed TaqMan Assay Reagents β-actinを用いて TaqMan^® アッセイを行いました。その結果、いずれの濃度でも良好な増幅曲線を得ることが出来ました。増幅していない曲線はブランク（蒸留水）です。




●保存について
長期保存の場合は−20℃（遮光）保存をお薦めしますが、短期間に連続使用する場合、3週間程度であれば4℃（遮光）保存可能です。

●プライマーの設計について
コチラご参照ください。

●サンプル添加量について
10μlなどの少量で反応させる場合は、サンプル添加量を1μlなどの極少量にせず、
希釈して2μl程度添加することにより、ピペット誤差が抑えられ良好な結果を得ることができます。

●パッシブリファレンス色素に関しまして
あらかじめ混合されています。プレートタイプのPCR機器にそのままご使用いただけます。
また、パッシブリファレンス色素を使用しないPCR機器への影響もありません。

●機器に関しまして
弊社で取り扱っております核酸増幅リアルタイムモニタリング装置BioFlux社LineGeneをご使用いただけますと、反応液量10μlからの正確なアッセイが可能ですので、よりコストパフォーマンスの高い解析が可能となります。LineGeneは、訪問デモサービスも行っております。お気軽にご相談ください。

●1 step RT-PCRに関しまして
逆転写酵素ReverTra Ace^® とRNase inhibitorを組み合わせることにより、1 step RT-PCRを行うことができます。詳細はプロトコル（PDFファイル）をご参照ください。プロトコルは下記価格表の製品名をクリックしていただくとご覧いただけます。　


Sakurai T. et al., Transgenic Res 17:149–155 (2008)
Tan C. et al., FEMS Microbiol Lett 278:108–114 (2008)
Hao P. et al.,  Plant Physiol. 146(4):1810-20 (2008)
HAYASHI Y. et al., Biol. Pharm. Bull. 30(4):763-771 (2007)
Li Z. et al., Clin Biochem Nutr. 41(1): 58–67(2007)

品名	包装※	保存温度	Code No.	価格
SYBR® Green Realtime PCR Master Mix	40回用（1ml×1本）	-20℃	QPK-201T	￥10,000
	200回用（1ml×5本）	-20℃	QPK-201	￥37,000
	1000回用 （1ml×25本）	-20℃	QPK-201X5	￥170,000
SYBR® Green Realtime PCR Master Mix　-Plus-	40回用（1ml×1本）	-20℃	QPK-212T	￥10,000
	200回用（1ml×5本）	-20℃	QPK-212	￥37,000
	1000回用 （1ml×25本）	-20℃	QPK-212X5	￥170,000
Realtime PCR Master Mix	40回用（1ml×1本）	-20℃	QPK-101T	￥10,000
	200回用（1ml×5本）	-20℃	QPK-101	￥37,000
	1000回用 （1ml×25本）	-20℃	QPK-101X5	￥170,000

※本製品は2倍濃度に調製されています。上記使用回数は50μL反応計での使用回数です。
使用される容器などによって、推奨容量は異なりますので、ご注意ください。

ラベルライセンスについてのご説明

「FAQ」 
Realtime PCR Master Mix FAQ

「リアルタイムPCR関連記事」
●RT-PCRについて
●検出方法について
●プライマー設計について
●相対定量の考え方について

「リアルタイムPCR解説書」※タイトルをクリックしていただくとダウンロードできます（PDFファイル）
●私にもできた！ライフサイエンス実験シリーズ
『リアルタイムPCRに挑戦』

実施例2.Insert Check -Ready-を使用した簡易なサブクローニングのスクリーニング
1.7kbのインサートを含むpUC18から、制限酵素による切り出したインサートをpBluescript^® Ⅱへのサブクローニングし、本キットを用いてスクリーニングを行いました。
　この実験では、インサートが入ったpUC18を制限酵素で処理し、インサートとpUC18の分離を行うことなしに、その反応液をそのまま制限酵素処理したpBluescript^® Ⅱにライゲーションを行いました。ライゲーション産物は、pUC18にインサートがされたものとpBluescript^® Ⅱに挿入されたものが混在してた状態になっています。
　今回、この状態のDNAを用いて、JM109を形質転換して得られたコロニーについて本キットでコロニーダイレクトPCRによる解析を行いました。　本キットによるPCRでは、インサートが入っていない場合はpUC18から149bp、pBluescript^®Ⅱから275bpと約0.1kbの差が出ることを利用して、電気泳動により両者を区別することが可能です。
　結果、約1.9kbのLane3,5,7,9がpBluescript^® Ⅱ由来であり、約1.8kbのLane1,2,4,6,8,10がpUC18由来であることが分かりました。

●コロニーの持ち込み量について
コロニーの多量の持ち込みは、本酵素によるPCRを阻害します。
持ち込み量は少量の方がむしろ良い結果を得ることができます。
KOD -Plus-を用いた例ですが、菌体の持ち込み量と増幅量に
関する報告がございますので、ご参照ください。

Colony Direct-PCRによる黄色ブドウ球菌の遺伝子 プロフィール解析	UPLOAD No.69 p9-10
Colony Direct-PCRによる各種微生物遺伝子の 簡便・迅速検出	UPLOAD No.70 p15-16

●PCR産物の制限酵素処理について
＜Hバッファー・Mバッファーの制限酵素の場合＞
反応液量の20%を目安にPCR産物を使用することが可能です。

＜Lバッファーの場合＞
精製キット「MagExtractor^TM -PCR&Gel Clean up-」などを用いてPCR産物の精製を行うことをお薦めします。

●プライマー配列について
プライマー入り製品に含まれるプライマーの配列は以下のとおりです。
M13 Primer P7: 5'-CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-3'
M13 Primer P8: 5'-AGCGGATAACAATTTCACACAGGAAAC-3'

インサートのないベクターを増幅した場合の増幅産物のサイズの指標を以下に示します。

ベクター	pUC19	pBluescriptII	pGEM-11Zf(-)	pCR2.1	pTA2
サイズ	149bp	275bp	230bp	245bp	295bp

※pTA2は高効率TAクローニングキット「TArget Clone^TM」に使用されているベクターです。


基本反応条件：
＜コロニー＞
Insert Check -Ready-         50μl
コロニー　　　　　　　　　　少々*
(*菌体量を少なくするのがコツです。見えない程度で問題ありません）
　　　　　　　　　↓





製品内容：
〈PIK-101〉
InsertCheck -Ready-（プライマー入り）
 1ml×5本
　組成として以下を含む
　KOD Dash
　M13 Primer P7
　M13 Primer P8
　dNTPs
　Reaction Buffer

〈PIK-151〉
InsertCheck -Ready-（プライマーフリー）
 1ml×5本
　組成として以下を含む
　KOD Dash
　dNTPs
　Reaction Buffer

〈PIK-201〉
InsertCheck -Ready- Blue（プライマー入り） 1ml×5本
　組成として以下を含む
　KOD Dash
　M13 Primer P7
　M13 Primer P8
　dNTPs
　電気泳動用色素
　Reaction Buffer

〈PIK-251〉
InsertCheck -Ready- Blue（プライマーフリー） 1ml×5本
　組成として以下を含む
　KOD Dash
　dNTPs
　電気泳動用色素
　Reaction Buffer

保  存：
−20℃

1）T.Imanaka et al.,Appli.Environ.Microbiol.,60:4559−4556（1994）
2）Barnes,W.M.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,91:2216−2220（1994）
3）L.Amery et al.,Biochem J.,357: 635−646（2001）

  ※50μl反応時の使用回数を表示しています。

ラベルライセンスについてのご説明

品名	包装	輸送・ 保存温度	Code No.	価格
KOD Dash	250Units×1本	-20℃	LDP-101	￥25,000
	(250Units×1本)×5本	-20℃	LDP-101X5	￥100,000
	(250Units×1本)×10本	-20℃	LDP-101X10	￥180,000

「FAQ」
KOD Dash

「PCR実験関連情報」
●PCR Polymerase選択の指標
●DNA Polymeraseについて
●各PCR用Polymeraseの酵素的性質
●Exonuclease活性について　
●TdT(Terminal deoxynucleotidyl transferase)活性について
●ホットスタートについて
●Bufferによる性能の向上について
●PCRトラブルシューティング  

●RNase活性を阻害
本酵素は、RNaseAと結合してそのRNase活性を阻害する。RNAを鋳型として使用したり、RNAを産生させる実験において、RNaseからのRNAの保護に使用する事ができる。


実施例1.　RT-PCRにおけるRNase Inhibitorの効果
HL60細胞よりMagExtractor^® -RNA-を用いて抽出したTotal RNAを使用して、RT-PCRを実施した。Total RNAに微量のRNaseを添加し、Random PrimerでcDNA合成を行った後、RT-PCR によりHuman IL-8 mRNAを検出し、比較を行った。
 その結果、逆転写反応時にRNase Inhibitorを加えることで、安定したRT-PCRの結果を得られることが確認できた。

■用  途
●cDNA合成やin vitro Translation等、RNAを使用する実験におけるRNAの安定化
●RNAプローブの作成やin vitro Transcription等、RNAを産生する実験におけるRNAの安定化

製品内容：
RNase inhibitor（20−40U/μl）

形  状：
20mM Hepes-KOH（pH7.6）
50mM KCl
8mM DTT
50% Glycerol

活性の定義：
5ngのRNaseAの活性を50%阻害するのに必要な酵素量を1Uとする。

起  源：
Human placenta

保  存：
−20℃

比活性：
100U/μg protein

※基本的には、他の酵素の反応系のバッファー中にて使用することになりますが、反応液中のDTT濃度は少なくとも1mM程度必要です。また反応液のpHは、5.0−8.0が至適です。


1）Sambrook,J. et al.,Molecular Cloning A Laboratory Manual,Cold Spring   Harbor Laboratory（1982）
2）Scheele,G. and Blackburn,P., Proc.Natl.Acad.Sci.USA, 76:4898−4902（1979）
3）Blackburn,P. et al.,J.Biol.Chem., 252:5904−5910（1977）
4）Blackburn,P. and Jailkhani,B., J.Biol.Chem.,254:12488−12493（1979）

（※品名をクリックすると取扱説明書をご覧いただけます。）

品名	包装	保存	Code No.	価格
RNase inhibitor (Native)	2,500U×1本	-20℃	SIN-101	￥11,000
	（2,500U×1本）×5本	-20℃	SIN-101X5	￥44,000
RNase inhibitor (Recombinant)	2,500U×1本	-20℃	SIN-201	￥10,000
	（2,500U×1本）×5本	-20℃	SIN-201X5	￥40,000

※SIN-102,202が包装変更のためSIN-101X5,SIN-201X5にコード変更いたしました。

「PCR実験関連記事」
●RT-PCRについて

（製品名をクリックすると取扱説明書をご覧いただけます。）

品名	包装	保存	Code No.	価格
ReverTra Ace®	10,000U×1本	-20℃	TRT-101	￥17,000
	(10,000U×1本)×5	-20℃	TRT-101X5	￥68,000
	(10,000U×1本)×10	-20℃	TRT-101X10	￥119,000

※Code:TRT-102は包装変更のためTRT-101X5に変更となりました。


（製品名をクリックしていただくと詳細情報をご覧いただけます。）

品名	包装	保存	Code No.	価格
高効率逆転写キット ReverTra Ace -α-®	100回用	-20℃	FSK-101	￥53,000
リアルタイムPCR用 cDNA合成キット ReverTra Ace®  qPCR RT Kit	200回用	-20℃	FSQ-101	￥38,000
高効率RT-PCRキット ReverTra Dash®	100回用	-20℃	PCR-401	￥68,000
高正確性RT-PCRキット ReverTra -Plus-TM	100回用	-20℃	PCR-501	￥70,000
Oligo (dT)20	1nmole	-20℃	FSK-201	￥8,000
Randome Primer (9mer)	2.5nmole	-20℃	FSK-301	￥8,000
dNTPs Mixture (10mM)	各2μmoles	-20℃	NTP-301	￥8,000
RNase inhibitor (Native)	2,500U×1本	-20℃	SIN-101	￥11,000
	(2,500U×1本）×5本	-20℃	SIN-101×5	￥44,000
RNase inhibitor (Recombinant)	2,500U×1本	-20℃	SIN-201	￥10,000
	(2,500U×1本）×5本	-20℃	SIN-201×5	￥40,000
ReverTra Ace®用別売りBuffer	1mL	-20℃	TRT-1B	￥1,000

「関連記事」
RT-PCRについて

（製品名をクリックすると取扱説明書をご覧いただけます。）
（2-メルカプトエタノール）

品名	包装	保存温度	Code No.	価格
高性能RT-PCRキット ReverTra Dash®	100回用	-20℃	PCR-401	￥68,000

品名	包装	輸送・保存温度	Code No.	価格
高効率TAクローニングキット TArget cloneTM	10回用	-20℃	TAK-101	￥12,000

特長1： 伸長性に優れています

特長2：高い正確性
PCR用酵素として、正確性、増幅効率に優れた『KOD-Plus-』を使用。本キットがRT-PCRにて変異クローンを発生する確率は1Kbのターゲットをクローニングする場合3%と非常に低く、クローニングに適しています。


特長3：幅広いターゲットの増幅を実現
PCRバッファーの至適化を行い、増幅の困難なターゲットの増幅が可能となっています。

特長4：TAクローニングにも対応可能
KOD -Plus- は強いProof-reading活性を有するため、増幅産物の末端は平滑末端(Blunt end)になります。専用のTAクローニングキット『TArget Clone^TM -Plus-』を用いることにより、TAクローニングが可能です。

実施例1. RT-PCR増幅性能の比較（ターゲット長の比較）

 HeLa細胞由来の total RNAを鋳型として、各社高正確性RT-PCRキットを用いて増幅性能を比較しました。
その結果、本キットでは、他社キットに比べ、良好な結果を示すことが分かりました。



実施例2. RT-PCR増幅性能の比較（検出感度の比較）

HeLa細胞由来の total RNA（1μg）に既知量のE.coli由来ClpB RNAを混合し、各社高正確性RT-PCRキットを用いて検出し、感度の比較を行いました。
その結果、ReverTra -Plus-^TMの検出感度は他社の高正確性RT-PCRキットと比べて1オーダー以上優れていることが分かりました。



実施例記事
 High-Fidelity RT-PCRキット”ReverTra –Plus-^TM”を用いた遺伝子増幅　（UPLOAD Vol. 72 p11〜12）

＜ワンポイントアドバイス＞
●PCR産物のクローニング
本キットのRT-PCR産物は、平滑末端クローニング法によってクローニングできます。脱リン酸化処理されたベクターを用いる場合は、リン酸化されたPCR産物を用いる必要があります。また、本酵素のPCR産物は平滑化されているため、直接TAクローニングすることはできません。専用のTAクローニングキット『TArget Clone -Plus-』をご使用ください。

●PCRについて
Tm値の高いプライマー（＞72℃）を使用したPCRにおいて、エキストラバンドが確認された場合は、98℃-68℃の2ステップまたはステップダウンPCRを検討してください。

●コントロール系
初めて本キットを使用する場合は、コントロール実験を同時に行われることをお薦めします。本キットのコントロール用G3PDHプライマーは、Human、Mouse、Rat、及びSwineに対応しており、0.45kbのPCR産物を生じます。


1)Takagi, M. et al., Appl. Environ. Microbiol., 63: 4504-4510 (1997)
2)Hashimoto. H. et al., J. Biochem. (Tokyo), 125: 983-986 (1999)
3)Mizuguchi, H. et al., J. Biochem. (Tokyo), 126: 762-768 (1999)
4)Hashimnoto. H. et al., J. Mol. Biol., 306: 469-477 (2001)

(品名をクリックすることで取扱説明書をダウンロードいただけます）
（2-メルカプトエタノール）

品名	包装	保存温度	Code No	価格
高正確RT-PCRキット ReverTra  -Plus-TM	20回用	-20℃	PCR-501T	販売中止
高正確RT-PCRキット ReverTra  -Plus-TM	100回用	-20℃	PCR-501	￥70,000

品名	包装	輸送・保存温度	Code No.	価格
KOD用 TAクローニングキット TArget CloneTM-Plus-	10回用	-20℃	TAK-201	￥16,000

プライマー
『RT-PCR用プライマーリスト』

ヒト正常組織/細胞由来の高純度Total RNA
『Total RNA (Tissue＆Cell)』


ReverTra –Plus-^TM キット内容

		PCR-501	PCR-501T
パーツNo.		(100回用)	(20回用)
1	ReverTra Ace®	100μl	20μl
2	RNase Inhibitor	100μl	20μl
3	5×RT Buffer (25 mM MgCl2含有)	400μl	80μl
4	10 mM dNTPs	300μl	60μl
5	RNase Free H2O	1200μl	240μl
6	Oligo(dT)20 (10 pmol/μl)	500μl	100μl
7	Random Primer (25 pmol/μl)	100μl	20μl
8	Control Primer F (10 pmol/μl)	50μl	10μl
9	Control Primer R (10 pmol/μl)	50μl	10μl
10	Positive Control RNA (105 copies/μl) Human G3PDH RNA（転写poly(A)+RNA）	50μl	10μl
11	KOD -Plus-	100μl	20μl
12	10×PCR Buffer for ReverTra -Plus-	500μl	100μl
13	25 mM MgSO4	500μl	100μl

「PCR実験関連情報」
●RT-PCRについて
●PCR Polymerase選択の指標
●DNA Polymeraseについて
●各PCR用Polymeraseの酵素的性質
●Exonuclease活性について　
●TdT(Terminal deoxynucleotidyl transferase)活性について
●ホットスタートについて
●Bufferによる性能の向上について
●PCRトラブルシューティング

特長2：RT-PCR用として至適化
反応系として逆転写酵素反応産物の全量を持ち込んでもPCRを阻害しないように至適化されており、様々なPCR酵素を用いてRT-PCRが行うことができます。

特長3：簡便
本キットは、逆転写反応に必要な試薬を全て含んでいます。

ReverTra Ace^® キット内容(FSK-101 、100回用)

パーツNo.	パーツ名	容量
1	高効率逆転写酵素ReverTra Ace®	100μl
2	5×RT Buffer (25mM Mg含有)	400μl
3	RNase inihibitor (10U/μl)	100μl
4	dNTP Mixture (各10mM)	200μl
5	RNase Free H2O	1200μl
6	Oligo(dT)20 (10pmol/μl)	100μl
7	Random Primer (25pmol/μl)	100μl
8	Control Primer F (10pmol/μl)	50μl
9	Control Primer R (10pmol/μl)	50μl
10	Positive Control RNA (105 copies/μl) Human G3PDH RNA （転写poly(A)+RNA）	50μl

1) Hatta M. et al., Intl. J. Mol. Med., 9: 147-152 (2002)

（製品名をクリックしていただくと取扱説明書をご覧いただけます。）

品名	包装	保存	Code No.	価格
高効率逆転写キット ReverTra Ace -α- ®	100回用	-20℃	FSK-101	￥53,000

 

品名	包装	保存	Code No.	価格
Oligo (dT)20	1nmole	-20℃	FSK-201	￥8,000
Randome Primer (9mer)	2.5nmole	-20℃	FSK-301	￥8,000
dNTPs Mixture (10mM)	各2μmoles	-20℃	NTP-301	￥8,000
RNase inhibitor (Native)	2,500U×1本	-20℃	SIN-101	￥11,000
	(2,500U×1本)×5	-20℃	SIN-101X5	￥44,000
RNase inhibitor (Recombinant)	2,500U×1本	-20℃	SIN-201	￥10,000
	(2,500U×1本)×5	-20℃	SIN-201X5	￥40,000

「プライマー」
RT-PCR用プライマーリスト

「PCR実験関連情報」
●RT-PCRについて
●PCR Polymerase選択の指標
●DNA Polymeraseについて
●各PCR用Polymeraseの酵素的性質
●Exonuclease活性について　
●TdT(Terminal deoxynucleotidyl transferase)活性について
●ホットスタートについて
●Bufferによる性能の向上について
●PCRトラブルシューティング