PREPARATION and SPECIFICATION

Appearance White amorphous powder, lyophilized
Activity GradeⅢ
Contaminants Inorganic phosphate ≤0.01mg/g
Alkaline phosphatase ≤1×10-4 U/mg

PROPERTIES

Stability Stable at 4℃ for at least 6 months(Fig.4)
Molecular weight approx. 22,000 (SDS-PAGE)

APPLICATIONS

This peptide fragment is useful as a blocking reagent for ELISA, being an alternative to BSA.

FEATURES

1. Efficiency Excellent blocking performance.(Fig.1)
2. Operation Tim Shorter time of operation(Fig.2)
3. Sensitivity No interference on ELISA assay(Fig.3)

Examples

  • Fig.1. BPF-BSA Comparison: Blocking Efficiency

    Fig.1. BPF-BSA Comparison: Blocking Efficiency

    Peroxidase solutions containing BPF-301 or BSA were added to 96 wells polystyrene plate. The plate was incubated at 37℃ for 1hr and then washed with 0.02% Tween20. The blocking performance was evaluated by measuring the peroxidase activities retained on polystyrene plate. The lower absorbance shows the higher blocking performance. Blocking performance of BPF-301 is much higher than that of BSA.

  • Fig.2. BPF-BSA Comparison: Blocking Time

    Fig.2. BPF-BSA Comparison: Blocking Time

    BPF-301 or BSA solution was added to 96 wells polystyrene plate. The plate containing these blocking reagent was incubated at 4℃ for 5~180 minutes, and then washed with 0.02% Tween20. The blocking performance was measured by human serum and anti-human IgG goat antibody POD conjugate system. Operation time required for blocking reaction is shorter than that of BSA.

  • Fig.3. BPF-BSA Comparison: Measuring sensitivity

    Fig.3. BPF-BSA Comparison: Measuring sensitivity

    BPF-301 or BSA was used as a blocking reagent in ELISA assay for detection of hCEA. It was shown that no interference on ELISA assay was found in BPF-301.

  • Fig.4. Stability (Powder form)

    Fig.4. Stability (Powder form)

    Blocking performance was measured by the method mentioned in Fig.1.

使用例(Japanese)

例-1:ブロッキング能の簡易測定法

1.試薬

  • BPF溶液
    5㎎のBPF-301をPBS 10mlに溶解する。
  • BSA溶液(対照実験用)
    100㎎のBSAをPBS 10mlに溶解する。
  • POD溶液
    2㎎のPeroxidase(TOYOBO PEO-131)を上記BPF溶液又はBSA溶液1mlに溶解する。
  • プレート洗浄液
    0.02gのTween20を100mlのPBSに溶解する。
  • TMB溶液
    BioRad TMB substrate Kit (Cat.No.:172-1067)

2.手順

1.BPF溶液(試薬A)又はBSA溶液(試薬B)により, POD溶液(試薬C)を希釈する。

2. 上記POD希釈液100μlを96穴ポリスチレンプレートに添加, 室温にて1時間インキュベートする。

3.プレート中の溶液を捨て,プレート洗浄液(試薬 D)によりプレートを洗浄する。

4.TMB溶液(試薬E)100μlを添加, 37℃にて10分間インキュベートし発色させる。

5.1N H2SO4 100μlの添加により反応を停止した後, 450nmにおける吸光度を測定する。吸光度が低いほどブロッキング能が高い。

3.結果

優れたブロッキング能が確認された。(Fig.1参照)

例-2:BPF-301とBSAの操作時間の比較

1.試薬

  • BPF溶液
    : 7㎎のBPF-301を10mlの20mM Tris-HCl, pH7.0に溶解する。
  • BSA溶液(対照実験用)
    : 24㎎のBSAを10mlの20mM Tris-HCl, pH7.0に 溶解する。
  • ヒト血清希釈液
    : PBSにてヒト血清を希釈する(50倍希釈)。
  • プレート洗浄液
    : 0.02gのTween20を100mlのPBSに溶解する。
  • TMB溶液
    : BioRad TMB substrate Kit (Cat.No.:172-1067)
  • anti-human IgG goat antibody POD conjugate

2.手順

1.BPF溶液(試薬A)又はBSA溶液(試薬B)100μlを96穴ポリスチレンプレートに添加, 4℃にて数分~3時間インキュベートする。

2.プレート中の溶液を捨て,ヒト血清希釈液(試薬C) 25μlを添加する。

3.プレート中の溶液を捨て,プレート洗浄液(試薬D) によりプレートを洗浄する。

4.anti-human IgG goat antibody POD conjugate(試薬F)50μlを添加, 37℃にて1時間インキュベートする。

5.プレート中の溶液を捨て, プレート洗浄液(試薬D)によりプレートを洗浄する。

6.TMB溶液(試薬E)50μlを添加, 室温にて5分間インキュベートし発色させる。

7.1N H2SO4 50μlの添加により反応を停止した後, 450nmにおける吸光度を測定する。吸光度が低いほどブロッキング能が高い。

3.結果

BSAより短い操作時間で高いブロッキング能が得られた。操作時間は30分間で十分であった。(Fig.2 参照)

例-3:BPFとBSAの感度比較

1.試薬

  • BPF溶液
    : 7mgのBPF-301を10mlの20mM Tris-HCl, pH7.0に溶解する。
  • BSA溶液(対照実験用)
    : 24mgのBSAを10mlの20mM Tris-HCl, pH7.0に溶解する。
  • プレート洗浄液
    : 0.02gのTween20を100mlのPBSに溶解する。
  • TMB溶液
    : BioRad TMB substrate Kit (Cat.No.:172-1067)
  • hCEA MoAb溶液
    : carbonate buffer, pH9.6にてhCEAを希釈する (10ug/ml)。
  • CEA MoAb-POD conjugate
    : carbonate buffer, pH9.6にてCEA MoAb-POD conjugateを希釈する(250倍希釈)。
  • hCEA 標準液

2.手順

1.hCEA MoAb(試薬E)100μlを96穴ポリスチレンプレートに添加, 37℃にて1時間インキュベートする。

2.BPF溶液(試薬A)又はBSA溶液(試薬B)100μlを添加, 4℃にて3時間インキュベートする。

3.プレート中の溶液を捨て, hCEA 標準液(試薬G)50μl を添加, 37℃にて1時間インキュベートする。

4.プレート中の溶液を捨て, プレート洗浄液(試薬C)にてプレートを洗浄する。

5.CEA MoAb-POD conjugate(試薬F)50μlを添加, 37℃にて1時間インキュベートする。

6.プレート中の溶液を捨て, プレート洗浄液(試薬C)にてプレートを洗浄する。

7.TMB溶液(試薬D)50μlを添加, 室温にて5分間インキュベートし発色させる。

8.1N H2SO4 50μlの添加により反応を停止した後, 450nmにおける吸光度を測定する。吸光度が低いほどブロッキング能が高い。

3.結果

ELISAアッセイへの阻害は全く検出されなかった。 (Fig.3参照)